Protokół barwienia metodą cytometrii przepływowej (FACS) (barwienie powierzchni komórek)
- Zbierz, przemyj komórki (zawiesina pojedynczych komórek) i doprowadź liczbę komórek do stężenia 1-5x106 komórek / ml w lodowatym buforze FACS (PBS, 0,5-1% BSA lub 5-10% FBS, 0,1% azydek sodu NaN3 *) ). ...
- Dodaj 100 μl zawiesiny komórek do każdej probówki.
- Do czego służy cytometria przepływowa?
- Jaka jest zasada cytometrii przepływowej?
- Co może mierzyć cytometria przepływowa?
- Jak barwi się komórki do cytometrii przepływowej?
- Może cytometria przepływowa wykryć martwe komórki?
- Może cytometria przepływowa wykryć białaczkę?
- Dlaczego w cytometrii przepływowej wykorzystuje się światło laserowe?
- W jaki sposób stosuje się cytometrię przepływową w hematologii?
- Jak przedstawiasz dane cytometrii przepływowej?
- Może cytometria przepływowa wykryć chłoniaka?
- Jak długo trwają wyniki cytometrii przepływowej?
- Jak kompensujesz cytometrię przepływową?
Do czego służy cytometria przepływowa?
Cytometria przepływowa to metoda laboratoryjna stosowana do wykrywania, identyfikacji i liczenia określonych komórek. Ta metoda może również zidentyfikować określone komponenty w komórkach. Informacje te są oparte na cechach fizycznych i / lub markerach zwanych antygenami na powierzchni komórki lub w komórkach, które są unikalne dla tego typu komórek.
Jaka jest zasada cytometrii przepływowej?
Podstawową zasadą cytometrii przepływowej jest przechodzenie komórek w jednym szeregu przed laserem, aby można je było wykryć, policzyć i posortować. Elementy komórki są znakowane fluorescencyjnie, a następnie wzbudzane przez laser, aby emitować światło o różnych długościach fal.
Co może mierzyć cytometria przepływowa?
Cytometria, w swojej najczystszej postaci, jest pomiarem cech komórek, które mogą obejmować rozmiar komórek, liczbę komórek, cykl komórkowy i nie tylko. Technika ta umożliwia naukowcom uzyskanie bardzo szczegółowych informacji o poszczególnych komórkach.
Jak barwi się komórki do cytometrii przepływowej?
Rozcieńczyć odpowiedni drugorzędny odczynnik znakowany fluorochromem w 100 µl buforu do barwienia cytometrii przepływowej i dodać do komórek. Inkubuj przez co najmniej 30 minut w temperaturze 2–8 ° C lub na lodzie. Chronić przed światłem. Przemyć komórki dodając bufor barwiący do cytometrii przepływowej.
Może cytometria przepływowa wykryć martwe komórki?
Utrata integralności błony jest ostatecznym wskaźnikiem śmierci komórki w testach cytometrii przepływowej. Komórki, które wykluczają martwy barwnik komórek, są uważane za żywe, podczas gdy komórki z uszkodzoną błoną pozwalają barwnikowi wewnątrz komórki zabarwić składnik wewnętrzny, identyfikując w ten sposób komórkę jako martwą.
Może cytometria przepływowa wykryć białaczkę?
Immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej można przeprowadzić na próbkach krwi, szpiku kostnego lub innych w celu uzyskania dodatkowych informacji. Może wykrywać zarówno normalne komórki, jak i nieprawidłowe komórki, których wzór markerów jest zwykle widoczny przy określonych typach białaczki i chłoniaka.
Dlaczego w cytometrii przepływowej wykorzystuje się światło laserowe?
Lasery są używane w cytometrii przepływowej jako źródło wzbudzenia próbek komórek znakowanych fluoroforem. Często potrzeba wielu kolorów lasera, aby scharakteryzować wiele właściwości komórkowych.
W jaki sposób stosuje się cytometrię przepływową w hematologii?
Cytometrię przepływową zastosowano do dokładnej identyfikacji i fenotypu krwinek czerwonych biorcy (44). Cytometria przepływowa jest coraz częściej stosowana w banku krwi do oceny zanieczyszczenia leukocytami produktów krwiopochodnych o zmniejszonej liczbie leukocytów (45) (46).
Jak przedstawiasz dane cytometrii przepływowej?
Dane cytometrii przepływowej są zazwyczaj przedstawiane na jeden z dwóch sposobów: histogramy, które mierzą lub porównują tylko jeden parametr oraz wykresy punktowe, które porównują 2 lub 3 parametry jednocześnie na dwu- lub trójwymiarowym wykresie punktowym.
Może cytometria przepływowa wykryć chłoniaka?
Cytometria przepływowa może diagnozować klasycznego chłoniaka Hodgkina w węzłach chłonnych z wysoką czułością i swoistością.
Jak długo trwają wyniki cytometrii przepływowej?
Wzorce te porównuje się z normalnymi wzorcami, aby określić znaczenie wyników. Test trwa około trzech godzin i polega na zabarwieniu komórek, pobraniu komórek za pomocą cytometru przepływowego, a następnie zleceniu wykwalifikowanemu technikowi przeanalizowania wyników zapisanych w pliku komputerowym.
Jak kompensujesz cytometrię przepływową?
Jak prawidłowo skompensować 4-kolorową cytometrię przepływową
- 4 kroki do kompensacji 4-kolorowego eksperymentu. ...
- Wybierz właściwego przewoźnika do odszkodowania. ...
- Krok 2: Zbierz dane i upewnij się, że liczba zdarzeń jest wystarczająca. ...
- Oblicz poprawnie odszkodowanie. ...
- Zastosuj wartości kompensacji i sprawdź wyniki.