Różnica między nitrocelulozą a PVDF

Podczas gdy zarówno membrany nitrocelulozowe, jak i PVDF są używane do Western blotting i analizy aminokwasów, nitroceluloza jest idealna do wykrywania białek o niskiej masie cząsteczkowej, podczas gdy PVDF jest bardziej odpowiedni do wykrywania białek o wyższej masie cząsteczkowej.

1. Jaka jest różnica między membranami PVDF i nitrocelulozowymi?
2. Jakie są zalety i wady PVDF i nitrocelulozy?
3. Dlaczego nitroceluloza jest używana w Western blot?
4. Co to jest membrana PVDF?
5. Co oznacza PVDF?
6. Dlaczego moczyć membranę PVDF w metanolu?
7. Jak dbać o membrany PVDF?
8. Czy białko może przejść przez membranę PVDF?
9. Jak aktywować membranę nitrocelulozową?
10. Dlaczego glicyna jest używana w buforze do uruchamiania?
11. Jaka jest wielkość porów nitrocelulozy?
12. Jaka jest zasada western blot?

Jaka jest różnica między membranami PVDF i nitrocelulozowymi?

Membrany PVDF mają wyższą zdolność wiązania białek niż nitroceluloza. Zdolność wiązania białek PVDF waha się od 150-200 µg białka / cm² a zakres nitrocelulozy wynosi od 80-100 µg białka / cm². Chociaż PVDF ma wyższą zdolność wiązania, w niektórych okolicznościach może to skutkować zwiększonym tłem.

Jakie są zalety i wady PVDF i nitrocelulozy?

3. Jakie są zalety i wady PVDF i nitrocelulozy? PVDF to wysoce niereaktywny plastik, który unieruchamia białka w oparciu o niespecyficzne powinowactwo do aminokwasów. PVDF jest preferowany w stosunku do nitrocelulozy, ponieważ zapewnia lepszą retencję białek, wytrzymałość i kompatybilność chemiczną.

Dlaczego nitroceluloza jest używana w Western blot?

Membrany nitrocelulozowe są popularną matrycą stosowaną do blottingu białek ze względu na ich wysokie powinowactwo do wiązania białek, zgodność z różnymi metodami wykrywania (chemiluminescencja, chromogenność i fluorescencja) oraz zdolność do immobilizacji białek, glikoprotein lub kwasów nukleinowych.

Co to jest membrana PVDF?

Membrany z fluorku poliwinylidenu (PVDF) wiążą biocząsteczki poprzez oddziaływania hydrofobowe. Pory błony zwiększają powierzchnię wiązania, jednocześnie ograniczając rozmiary związanych białek. ... Posiada wyższą zdolność wiązania białek i wyższą retencję niż membrany 0,45 µm.

Co oznacza PVDF?

PVDF to skrót od polifluorku winylidenu, który można również określić jako PVF2. Polimer ten należy do klasy materiałów znanych jako fluorowęglowodory lub fluoropolimery, które charakteryzują się wysoką stabilnością termiczną i doskonałą odpornością chemiczną.

Dlaczego moczyć membranę PVDF w metanolu?

Krótkie płukanie (15-30 sekund) w metanolu (lub innym 100% alkoholu (etanolu lub izopropanolu)) przed transferem metodą Western „uwodni” membranę i umożliwi lepsze przenoszenie i wiązanie białek. Membrany nitrocelulozowe są hydrofilowe, więc mogą być w pełni uwodnione przez wodne bufory.

Jak dbać o membrany PVDF?

Aby dłużej przechowywać membranę NC lub PVDF z transferem białka, lepiej jest wysuszyć membranę, a następnie przechowywać w temperaturze -20^oC bez składania. W przypadku membrany PVDF wystarczy spłukać metanolem przed osuszeniem.

Czy białko może przejść przez membranę PVDF?

Początkowy transfer przeprowadzony przez noc (16 godzin) przy 30 V nie powiódł się, ponieważ małe i średniej wielkości białka (mniejsze niż 100 kDa) przenosiły się bezpośrednio przez błonę (co widać po barwieniu błota metodą Ponceau i barwieniu żelu Coomassie).

Jak aktywować membranę nitrocelulozową?

Wspomnieli, że: Nitroceluloza - umieść membranę bezpośrednio w płytkim naczyniu zawierającym 50 ml 1X Transfer Buffer na kilka minut. Bibuła filtracyjna - Bibułę filtracyjną zanurzyć na krótko w 1X buforze transferowym bezpośrednio przed użyciem. Żel — Użyj żelu natychmiast po cyklu.

Dlaczego glicyna jest używana w buforze do uruchamiania?

Glicyna znajduje się w buforze roboczym, którego pH zwykle wynosi 8,3. ... Kiedy przyłożone jest pole elektryczne, aniony glicynianowe uderzają w bufor układający o pH 6,8 i zmieniają się w głównie obojętne obojnacze glicyny. Oznacza to, że z powodu braku ładunku przemieszczają się powoli przez warstwę układającą w kierunku anody.

Jaka jest wielkość porów nitrocelulozy?

Membrana nitrocelulozowa firmy Bio-Rad o wielkości porów 0,2 µm jest w 100% wykonana z nitrocelulozy. Czysta nitroceluloza jest najczęściej używaną membraną do transferu zarówno białek, jak i kwasów nukleinowych.

Jaka jest zasada western blot?

Western blotting (blotting białek lub immunoblotting) to szybki i czuły test do wykrywania i charakteryzowania białek. Opiera się na zasadzie immunochromatografii, w której białka są rozdzielane na żel poliakryloamidowy zgodnie z ich masą cząsteczkową.